一、 樣本運輸 可冷藏(0-8℃)運輸 /建議冷凍運輸(盡可能長時間保持冷凍狀態) 二、 樣本的保存、檢驗與復檢: 1. 尿樣 1) 保存 首先,進行酸化(自然或24h尿液加入10-15 ml ,6 M HCl) 其次,保存于冷藏(2-8℃) 最后,冷藏(2-8℃)條件下保存2天 2) 檢驗與復檢 在接收到尿樣的3天內檢驗與復檢,此期間樣本中兒茶酚胺濃度穩定。 2. 血樣 1) 保存 首先,建議接收血漿后加入穩定劑(EDTA和焦亞硫酸鈉,終濃度分別為1和4 mM,配置見附件一) 其次,①保存于冷藏(2-8℃)/②建議分為2份凍存 2) 檢驗 ①收到血樣后盡量馬上開始檢驗 / ②融化凍存備份檢驗 3) 復檢 ①血樣保存于冷藏(2-8℃),待第二天復檢 / ②融化凍存備份檢驗 三、 不同樣本類型的檢驗順序 尿樣與血樣同時檢測時,先做尿樣,再做血樣(尿樣的加樣量與標準品和質控品相同) 尿樣與血樣的標本孔以及試管做標記區別。 四、 檢驗過程和標準曲線 1. 標準曲線可以作單孔,剛開始時做雙孔。 2. 新鮮配置的酶溶液與標準、質控、樣本的加樣順序可調換。 3. DOP多巴胺的A/B標準品,為防止出錯,可以不加(加與不加差別不大)。 4. DOP多巴胺分析,萃取后尿與血的取樣量不同(25和50ul); 同時,與ADR和NOR不同,DOP的標準、質控和尿液樣品中需要加入25ul的HCl。 五、 連續不間斷進行檢測實驗結果較好 六、 測量:雙波長測量 七、 復檢注意事項 1. 尿樣的復檢:尿樣的異常高值,檢測pH值后再次復檢,因為尿液的pH值需要呈現酸性。 2. 血樣的復檢:推薦檢測分份備存樣品。 附件一 配置 50ml: (加熱溶解) Na2EDTA 1mol/L 1 mol/L *5×10-2L *372.24 g/mol =18.61 g Na2S2O5 4mol/L 4 mol/L *5×10-2L *190.09 g/mol =38.02 g 使用:2ml血中加入2ul
1.實驗前先將試劑放置至室溫平衡30分鐘。 2.嚴格按照試劑盒使用說明書操作。 3.包被板打開后,將剩余板條裝入鋁箔袋,用密封袋封好,以免污染受潮。 4.準備加樣時,先將所有試劑搖勻后再開始進行實驗。 5.看清加樣量、操作步驟及反應時間。 6.加樣頭不可混用,以免交叉污染。 7.加酶結合物及抗體時,加樣頭不要碰觸板孔(懸空加樣),以免交叉污染。 8.注意試驗溫育時間。 9.洗滌液按1:20比例配制。例:20ml洗液+380ml蒸餾水 10.洗板時,甩干反應液,用洗液注滿各孔,靜置20秒,甩干孔內液體,重復5次。 11.洗滌后,將孔內殘留液拍干。 12 .混合A、B底物液,在洗板前5分鐘按1:1混合,混好后搖勻,避光放置。 13.加入A、 B底物后,震蕩混勻,應迅速避光,等待測量。 14.避光等待測量時間,不可太長,嚴格控制在5—10內測量。 試劑盒注意反應原理,以便在使用儀器設置時,選擇正確擬和方法。 注:夾心法——在分析方法中選擇:雙對數(Log-Log) 競爭法——在分析方法中選擇:雙對數(Log-Logit)
C-P: 空腹:0.29~3.48 餐后0.5h:2.14~17.48 餐后1h:1.2~13.92 餐后2h:0.45~8.74 餐后3h:0.41~5.52 INS: 空腹:2~25 餐后0.5h:18.6~126.84 餐后1h:9.18~103.62 餐后2h:3.57~64.58 餐后3h:3.72~25.36
誤差來源:放射免疫分析誤差主要來源于以下方面 1.1計數誤差(counting error) 由放射性計數統計漲落和非特異計數造成的誤差。同樣計數時間,高放射性計數率的相對誤差要比低放射性計數率的小。在實際上,每管的非特異計數率是不一樣的,然而在數據處理時卻把它當作一個恒定的數,從而產生非特異計數誤差。在使用雙道或多道γ-計數器時,還會存在“道間”計數誤差。 1.2 稀釋誤差(diluteing error) 由配制溶液引起的誤差。尤其在倍比稀釋時,誤差隨稀釋次數的增加而越來越大。 1.3 回收誤差(recovery error) 由樣品提取、濃縮等制備操作帶來的誤差。回收率對所有待測樣品并不是恒定不變的。 1.4 加樣誤差(sampling error) 由多次加樣操作帶來的誤差。尤其使用非連續的普通加樣器時更是如此。 1.5 漂移誤差(excursion error) 由長時間手工操作造成的試管間反應時間的誤差。溫育時間短、標本量大的分析最容易產生這種誤差。 1.6 錯分誤差(misclassifyication error) 由分離環節帶來的誤差。在RIA實驗中,進行結合部分與游離部分分離操作時,把結合部分分到游離部分,或把游離部分殘留在結合部分,從而產生錯分誤差。 1.7 人員誤差(personal error) 由實驗人員主觀原因造成的誤差。其大小程度因人而異,取決于實驗人員的技術素質、心理狀態以及對工作的認真程度。 1.8 計算誤差(calculating error) 由不同的劑量—反應曲線擬合模型造成的誤差。在用計算機程序或計算器處理大量數據的今天,同一套原始實驗數據在不同的數學模型下計算,獲得的結果之間存在一定的差異。此外,對個別原始實驗數據取舍的依據不同也會帶來計算誤差。
*原因 1)緩沖液里有吐溫; 2)分離劑里的PEG。 *解決辦法 1)停機后立刻就要吸取上清。 2)先抽吸標準,后抽吸樣品。 3)抽吸的時候在管子固定位置抽吸,大概在沉淀上方10多mm左右管子的一圈凸起的部分。 4)保持抽吸手法一致,及時抽吸完發現有液滴,也無需再次抽吸;如若再次抽吸,會把沉淀抽走,導致較大偏差。

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